1.微囊懸浮劑、微囊懸浮-懸浮劑、緩釋粒劑應如何開展試驗并測定試驗溶液濃度？
答：上述類型制劑需采用靜態(tài)法進行試驗。試驗時分別測定（囊內）緩釋有效成分的游離態(tài)和全部態(tài)濃度。建議通過離心的方法檢測水樣中的游離態(tài)濃度，采用有機溶劑萃取的方法檢測水樣中的全部態(tài)有效成分。
2.當供試物為原藥，以水中溶解度上限作為試驗濃度時，若死亡率（或抑制率）<50%，可否直接判定LC50（或EC50）>該溶解度上限？還是應通過其他方式，例如添加有機溶劑助溶，以求得確切的毒性端點值？
答：當供試物在水中溶解性較差時，預試驗階段應安排飽和溶解度探索性試驗，以確定試驗條件下供試物在試驗體系中可達到的最大溶解度。為了增大供試物在試驗液中的溶解，可采取超聲、攪拌、振蕩、加助溶劑等措施。具體方法可參考OECD GD 23和OCSPP 850. 1000相關指導文件。當使用助溶劑對提高水中溶解度作用不大時，優(yōu)先使用直接溶解法。當供試物在飽和狀態(tài)下未表現(xiàn)出急性毒性時，即最大溶解度下死亡率（或抑制率）<50%時，可以“LC50 (或EC50）>該試驗濃度上限”作為試驗結果。試驗報告中應詳細描述飽和試驗液制備方法（含前期對試驗液制備的探索性試驗過程），提供供試物的水溶解度，并對飽和溶液進行評估。
3.是否所有試驗液均應進行離心或過膜處理以獲得真溶液？
答：真溶液是指由至少兩種物質組成的均一、穩(wěn)定的混合物,被分散的物質以分子或更小的質點分散于另一物質中。水生生物試驗中，應將供試物配制成均一和穩(wěn)定的溶液、懸浮液或乳狀液開展試驗，不應片面追求“真溶液”（尤其是當供試物為混配制劑時）。以下情況可以將受試生物直接暴露于試驗液中開展試驗：①不經(jīng)過膜/離心處理,試驗液呈現(xiàn)均勻、分散狀態(tài)時；②試驗液中存在微量不溶物，但預試驗結果表明不溶物不會對試驗生物產生物理性損傷/致死等作用的。但應注意，采用上述試驗液直接染毒的情況下，應在有效成分濃度檢測過程中采取相應措施，將水樣進行離心/過膜處理獲得真溶液后再進行后續(xù)的前處理操作。
4.當供試物為懸浮劑，配制成試驗液靜置后產生沉淀時，可否進行抽濾或虹吸處理？
答：短暫靜置后出現(xiàn)沉淀時可通過抽濾、分液漏斗或虹吸等方式分離沉淀物；試驗過程中出現(xiàn)沉淀時應進行記錄并寫入最終試驗報告，并建議使用損失后的測量濃度算術平均值表示試驗結果。上述情況下，為測定試驗液中有效成分濃度進行相關前處理前，應將水樣進行離心/過膜處理，以獲得真溶液。
5.試驗液體積過大不宜進行離心處理，而過膜速度又很慢時，可否提前1d制備試驗液并開始過濾？
答：試驗液體積較大時，可采用適當增大濾膜孔徑、分液漏斗或虹吸等方式去除懸浮物后用于暴露。但是，為測定試驗液中有效成分濃度進行相關前處理前，應將水樣進行離心/過膜（濾膜孔徑<0.45pm）處理，以獲得真溶液。至于可否提前1d配制試驗液并過濾，應綜合考慮供試物的特性，如穩(wěn)定性等。
6.對于有效成分溶解度相差較大的混配制劑,應如何制備試驗液？
答：開展混配制劑毒性試驗時，應優(yōu)先考慮直接將儲備液稀釋到試驗濃度,配制成懸浮液或乳狀液，再根據(jù)實際情況判斷是否需要在暴露前對試驗液用分液漏斗、虹吸、離心、過膜等方式去除懸浮物。不宜采用將儲備液過膜/離心后稀釋的方法配制試驗液，該方法易導致試驗液中各有效成分的配比較其制劑產品中的配比發(fā)生很大變化。
7.混配制劑產品中各有效成分的溶解度有時差異較大，會出現(xiàn)一個組分的含量低于儀器檢出限而另一組分超出儀器檢測限的情況，該如何處理？
答：各組分分別采樣檢測，針對不同組分分別采取稀釋或富集等方法進行處理，以達到檢測分析的目的。
8.對于毒性較高或水溶解度較低的農藥，由于試驗濃度較低，有時無法檢出，可否不對試驗液濃度進行測定，而通過測定儲備液濃度推算試驗液濃度？
答：首先，應分析有效成分無法檢出的原因，包括是否選擇了正確的分析方法（如菊酯類農藥應采用氣相色譜法用ECD 檢測器進行檢測）、前處理方法是否得當?shù)取Ｈ缓�，通過采用更適宜的分析方法、更高精度的分析儀器,以及提高前處理技術水平等技術措施提高檢測水平，檢測每個處理組中的試驗濃度。
經(jīng)過多種改進仍無法檢測的，應在試驗報告中詳細描述化學分析方法建立過程以及最終選用的化學分析方法，以確認所選用的方法已經(jīng)是目前最先進的（包括采取了可行的濃縮處理）。缺少滿足定量檢測要求的分析方法時，試驗應選用半靜態(tài)方法或流水式方法。
所有處理組濃度都無法定量的，可采用儲備液的實測濃度推算試驗液的理論濃度；當部分處理組濃度可定量，部分處理組濃度低于定量限時，在分析方法正確、有效且試驗過程中進行了供試物濃度檢測的前提下，對于未檢出供試物的，也可使用供試物的檢測限作為終濃度；對于檢出供試物但不能定量的，可用分析方法定量限的1/2作為終濃度。半靜態(tài)試驗中，初始濃度可檢出，24h濃度無法檢出時，試驗結果可以初始實測濃度計。如可行，建議適當增加檢測頻率，如暴露后12h。
（以上內容來源《農藥登記環(huán)境影響試驗常見問題解答》）
